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Heidenhain铁苏木素染色液以硫酸铁铵作为氧化剂和分化剂，根据不同的分化程度可显示不同的结构，染色后所有成分均为黑色或深灰黑色，不同组织结构的苏木素着色可被Heidenhain分化液以不同的速度进行性褪去，黑色褪去顺序依次为：线粒体、横纹肌、核染色质。

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

• 自来水或蒸馏水、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液、盐酸乙醇分化液、系列乙醇、中性树胶
  
• 蓝化液（稀氨水、碳酸锂溶液等）、乙醚-乙醇混合固定液、4%多聚甲醛

• Heidenhain Differentiation媒染时间和Heidenhain铁苏木素染色液染色时间根据不同的固定液而异；一般情况下媒染和染色时间控制在1h即可，参考时间为：福尔马林、Bouin固定液、Carnoy固定液1h，Helly、Zenker等重铬酸盐固定液3h，四氧化锇、Flemming固定液24h。
  
• 显微镜下控制分化程度，直到出现所需观察的结构；若分化过度，可用苏木素重染相同时间并重新分化；亦可用蒸馏水2:1稀释Heidenhain Differentiation后再进行分化，以便更好控制分化程度。
  
• 切片分化后应彻底冲洗洗掉所有分化液，组织不易褪色。
  
• 胞浆复染(伊红或橙黄G)可突出核染色质，尤其在显示染色体或有丝分裂更有效，本试剂提供了伊红复染液，但不是必需步骤。
  
• 切片脱蜡应尽量干净。
  
• 系列乙醇应经常更换新液。
  
• 冷冻切片染色时间尽量要短。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 切片脱蜡至水
  
  • 二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(GL2755)作用2次，每次5～10min。
    
  • (可选)无水乙醇作用2次，每次3～5min。
    
  • 95%乙醇，3～5min。
    
  • 90%乙醇，3～5min。
    
  • 80%乙醇，3～5min。
    
  • 自来水或蒸馏水(亦可用30～40℃温水)冲洗，1～3min。
• 染色
  
  • Heidenhain Differentiation媒染，1h。
    
  • 自来水或蒸馏水冲洗，5～10s。
    
  • Heidenhain铁苏木素染色液染色，1~2h。
    
  • 自来水冲洗，20～40s。
    
  • 用蒸馏水1:1稀释Heidenhain Differentiation分化，并与自来水冲洗交替进行，显微镜下观察分化程度。
    
  • 自来水冲洗，20～40min。
    
  • (可选步骤)伊红染色，20～120s。
    
  • 自来水冲洗，30～60s
• 脱水、透明、封固
  
  • 80%乙醇，10～20s。
    
  • 90%乙醇，10～20s。
    
  • 95%乙醇作用2次，每次1～2min。
    
  • 无水乙醇作用2次，每次2～3min。
    
  • 二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(GL2755)透明3次，每次2～3min。
    
  • 中性树胶封片、镜检。